Kỹ thuật real time pcr là gì

Bệnh viện Đa khoa Hồng Ngọc là một trong những bệnh viện tư nhân đầu tiên được Viện vệ sinh dịch tễ TƯ – Bộ Y Tế cấp giấy chứng nhận năng lực xét nghiệm khẳng định vi rút SAR-CoV-2 bằng kỹ thuật realtime RT-PCR.

Từ tháng 10/2020, Bệnh viện Đa khoa Hồng Ngọc chính thức được công nhận đủ điều kiện thực hiện xét nghiệm khẳng định virus SAR-CoV-2 bằng kỹ thuật Realtime RT-PCR do Viện vệ sinh dịch tễ TƯ – Bộ Y Tế cấp giấy chứng nhận.Với năng lực xét nghiệm được Bộ Y tế chứng nhận, thời gian vừa qua Bệnh viện Hồng Ngọc đã thực hiện xét nghiệm COVID-19 bằng kỹ thuật Realtime RT-PCR cho rất nhiều cơ quan, tổ chức, doanh nghiệp.

Có thể kể đến các công ty như Công ty TNHH Eastech Việt Nam, Công ty Cổ phần Daikin Air Conditioning chi nhánh Hưng Yên, Công ty TNHH Sews Components Việt Nam… Điều đó cho thấy Hồng Ngọc đã và đang thực hiện rất tốt dịch vụ này, nhận được sự tin tưởng của khách hàng, đáp ứng nhu cầu xét nghiệm virus SAR-CoV-2 đang ngày một cấp thiết đồng thời góp phần giảm tải cho các bệnh viện khối công lập.

Hiện tại, Bệnh viện Hồng Ngọc cung cấp dịch vụ xét nghiệm RT-PCR cho tất cả khách hàng có nhu cầu như: - Làm hồ sơ xuất cảnh, du học- Lái xe vận chuyển hàng hóa- Các cá nhân cần giấy xét nghiệm âm tính với COVID-19 để đi làm, di chuyển giữa các địa phương hoặc cần khám sàng lọc COVID-19- Tổ chức, doanh nghiệp có nhu cầu xét nghiệm sàng lọc Covid-19 cho nhân viên….

Để được tư vấn xét nghiệm PCR, vui lòng nhập thông tin bên dưới.

Mọi thông tin của quý khách cung cấp đều được bảo mật

• Khám sàng lọc kỹ lưỡng với bác sĩ trước khi lấy mẫu xét nghiệm.
• Khu vực khách hàng đăng ký lấy mẫu xét nghiệm Covid–19 được phân luồng riêng biệt với khu vực dành cho khách hàng đến khám thông thường, đảm bảo an toàn mùa dịch theo quy định của Bộ Y tế.
• Đội ngũ nhân viên y tế được trang bị đầy đủ bảo hộ, dụng cụ lẫy mẫu và tuân thủ nghiêm ngặt quy trình, kỹ thuật lấy mẫu xét nghiệm.
• BVĐK Hồng Ngọc thực hiện xét nghiệm Covid-19 bằng phương pháp RT-PCR tại cơ sở 55 Yên Ninh, Ba Đình, Hà Nội
• Hệ thống máy móc xét nghiệm hiện đại, cho kết quả chẩn đoán chính xác
• Trả kết quả sớm, tùy thời gian lấy mẫu
• Form chứng nhận xét nghiệm đúng chuẩn hồ sơ và yêu cầu từ các đại sứ quán
• Lấy mẫu 24/7, tất cả các ngày trong tuần [kể cả Thứ 7, Chủ nhật] tại 7 cơ sở của Hệ thống Y tế Hồng Ngọc.

• Người có yếu tố dịch tễ, sinh sống tại khu vực có ca mắc Covid-19 trong vòng 28 ngày.
• Người có các dấu hiệu như ho, sốt, rát họng… cần xét nghiệm để sàng lọc.
• Người tiếp xúc trực tiếp ca nhiễm Covid-19, nhưng chưa thể thực hiện xét nghiệm Realtime RT-PCR trong thời gian ngắn.
• Người cần di chuyển liên tỉnh như lái xe, giao hàng, người cần giấy thông hành về quê.
• Người lao động làm việc trong môi trường đông đúc, kín gió như khu công nghiệp, nhà máy…
• Áp dụng cho các cơ sở y tế chưa đủ điều kiện xét nghiệm sàng lọc Covid-19 bằng phương pháp RT-PCR.

Hiện nay, có 2 phương pháp xét nghiệm để chuẩn đoán Virus Sars-Cov-2:

Test nhanh Covid-19 là phương pháp xét nghiệm giúp phát hiện các protein trên bề mặt của virus SARS-CoV-2 [xét nghiệm kháng nguyên] hoặc phát hiện các kháng thể do hệ thống miễn dịch của cơ thể phản ứng với việc lây nhiễm COVID-19 [xét nghiệm kháng thể]. Xét nghiệm tìm kháng thể thường dùng để sàng lọc xem cá nhân đó có đáp ứng miễn dịch với loại virus này hay không và nếu có kháng thể trung hòa đặc hiệu thì cơ thể sẽ ghi nhớ miễn dịch giống như tiêm vaccine.

Ưu điểm - Thời gian trả kết quả nhanh chóng từ 15-30 phút. - Chi phí thấp.- Kỹ thuật xét nghiệm đơn giản, dễ thực hiện.- Phù hợp sử dụng để khoanh vùng, sàng lọc ca nghi nhiễm trên diện rộng.

Nhược điểm

- Độ nhạy kém nên tỷ lệ dương tính - âm tính giả tương đối cao, do vậy dễ bỏ lọt các ca nhiễm bệnh và gây lan dịch âm thầm trong cộng đồng. Với kết quả dương tính của phương pháp này cần phải khẳng định lại bằng phương pháp sinh học phân Realtime PCR.- Độ ẩm và nhiệt độ nơi xét nghiệm có thể ảnh hưởng đến kết quả. - Mẫu bệnh phẩm nếu bị lẫn máu sẽ ảnh hưởng tới kết quả xét nghiệm

Chi phí test nhanh kháng nguyên COVID-19 bao nhiêu tiền phụ thuộc vào nguồn gốc, nhà sản xuất bộ kit test nhanh. Chính vì vậy, giá test nhanh COVID-19 có sự khác nhau giữa các đơn vị được Bộ Y tế cho phép thực hiện xét nghiệm này.

Xét nghiệm PCR [Polymerase chain reaction] thực hiện bằng kỹ thuật Real Time hay gọi tắt là RT-PCR. Trong kỹ thuật này, dịch phết hầu họng của người nghi nhiễm được lấy để phân tích vật chất di truyền, phát hiện một đoạn gen đặc trưng của vi rút SARS-CoV-2 để kết luận về sự hiện diện của vi rút SARS-CoV-2 trong mẫu bệnh phẩm. Xét nghiệm realtime RT-PCR hiện là phương pháp phổ biến và có độ chính xác cao nhất để xác định xem một người có nhiễm virus SARS-CoV-2 hay không. Phương pháp này cần ít nhất từ 2-5 giờ đồng hồ để cho kết quả; cần các trang thiết bị, vật liệu phụ trợ đặc biệt đồng thời đỏi hỏi kỹ thuật viên thực hiện xét nghiệm phải được đào tạo bài bản. Kỹ thuật này chỉ được thực hiện ở những bệnh viện đủ điều kiện được các Sở Y tế cho phép. Cần thưc hiện xét nghiệm realtime RT-PCR ít nhất từ 3-5 lần tại nhiều thời điểm khác nhau mới xác định có nhiễm vi rút SARS-CoV-2 hay không. Ngoài ra, trong quá trình đợi kết quả và giữa các lần xét nghiệm, người được xét nghiệm cần phải cách ly để tránh nguy cơ lây nhiễm cho cộng đồng.

• Làm hồ sơ xuất cảnh; du học
• Lái xe vận chuyển hàng hóa; và di chuyển giữa các địa phương.
• Các cá nhân cần giấy xét nghiệm âm tính với COVID-19 để đi làm
• Cần khám sàng lọc COVID-19 một cách chính xác
• Tổ chức, doanh nghiệp có nhu cầu xét nghiệm sàng lọc Covid-19 cho nhân viên.
• Đối tượng khác...Có nhu cầu xét nghiệm Covid với độ chính xác cao

Ưu điểm của Xét nghiệm RT-PCR - Độ chính xác cao với độ nhạy và độ đặc hiệu >95%; - RT-PCR ít có khả năng mang lại âm tính giả hơn so với các phương thức thử nghiệm khác; - Cho ra kết quả định lượng nồng độ vi rút tại thời điểm xét nghiệm. Do đó hỗ trợ tốt cho bác sĩ trong việc tiên lượng tiến triển bệnh cũng như đánh giá hiệu quả điều trị;

Nhược điểm khi Xét nghiệm RT-PCR.

- Các báo cáo chỉ ra rằng độ chính xác của kết quả RT-PCR phụ thuộc rất nhiều vào: Thời gian thu thập mẫu; loại mẫu; quá trình bảo quản, lưu trữ và xử lý mẫu. - RT-PCR cho COVID-19 chỉ có thể cho biết liệu một người hiện đang bị nhiễm loại -coronavirus cụ thể này hay không. Nó không thể cung cấp thông tin về các bệnh hoặc triệu chứng khác. - Kết quả âm tính giả có thể xảy ra nếu mẫu không được lấy đúng cách hoặc nếu một cá nhân được xét nghiệm quá sớm sau khi tiếp xúc với vi rút hoặc quá muộn khi nhiễm vi rút. - Ngoài ra, kỹ thuật ngoáy mũi họng sâu đã được báo cáo là rất khó chịu đối với một số người lớn và trẻ nhỏ. - Thời gian trả kết quả kể từ khi lấy mẫu dài hơn so với phương pháp Test nhanh kháng nguyên. Thông thường, nó kéo dài trong khoảng 5-12 giờ. - Đòi hỏi cao về kỹ thuật của người lấy mẫu, kỹ thuật viên xét nghiệm và thiết bị, máy móc hiện đại. - Giá thành khá cao.

Thời gian trả kết quả tại Hồng Ngọc tùy thuộc vào thời gian lấy mẫu xét nghiệm:

Xét nghiệm RT-PCR mẫu đơn: 500.000VNĐ/mẫu

*Lưu ý: Ngoài giờ hành chính, sẽ thu thêm 20% phí của tất cả các dịch vụ xét nghiệm trên.

     Định lượng nồng độ virus trong máu được khuyến cáo sử dụng trong chẩn đoán, điều trị bệnh nhân nhiễm HBV và HCV bởi tất cả các hiệp hội gan mật và truyền nhiễm trên thế giới. Tất cả các bệnh nhân tham gia điều trị bằng các phác đồ kháng virus HBV, HCV đều phải định lượng virus trước và trong quá trình điều trị để theo dõi đánh giá phác đồ điều trị và tiên lượng kết quả điều trị

Nguyên lý kỹ thuật như sau:

Kỹ thuật TaqMan bao gồm một đầu dò oligonucleotide [probe] được gắn ở đầu 5´ một chất phát tín hiệu huỳnh quang [reporter] và ở đầu 3´ là một chất thu nhận tín hiệu [quencher]. Probe được thiết kế gắn với trình tự đích của mầm bệnh ở giữa mồi xuôi và mồi ngược của phản ứng PCR. Ở giai đoạn gắn mồi, probe gắn đặc hiệu vào trình tự đích, khi đó tín hiệu huỳnh quang phát ra từ Reporter đều bị Quencher dập tắt. Trong giai đoạn kéo dài khi mồi xuôi của phản ứng được kéo dài đến vị trí gắn của Probe thì taq DNA polymerase sẽ phá hủy các liên kết gắn giữa probe với trình tự đích và đồng thời phá hủy probe, làm cho Reporter và Quencher không còn ở gần nhau. Kết quả reporter phát ra tín hiệu huỳnh quang và hệ thống máy realtime PCR sẽ thu nhận tín hiệu huỳnh quang phát này. Tín hiệu huỳnh quang thu được tỷ lệ thuận với nồng độ các probe bị phá hủy. Tín hiệu này tăng lên gấp đôi sau mỗi chu kỳ khuếch đại. Dựa vào tín hiệu huỳnh quang thu được của mẫu bệnh phẩm và các mẫu chuẩn, phần mềm sẽ tính toán ra nồng độ ban đầu của vật chất di truyền trong mẫu thử.

    HBV-DNA định lượng bằng taqman probe được thiết kế nhắm vào trình tự bảo tồn của vùng preS/S của bộ gen HBV cho phép định lượng nồng độ HBV-DNA trong mẫu thử của cả 10 kiểu gen khác nhau của HBV với độ nhạy và độ đặc hiệu cao. Xét sử dụng cặp mồi đặc hiệu và mẫu dò [HBsF, HBsR, HBsTaq] khuếch đại một trình tự đặc hiệu của bộ gen HBV khoảng 80bp nằm trên gene S. Xét nghiệm thực hiện trên  trên hệ thống máy Realtime PCR 7500 của ABI.
    Định lượng HCV-RNA sử dụng kỹ thuật Realtime PCR Taqman Probe nhằm xác định số bản copy của virus viêm gan C trong 1ml huyết tương của bệnh nhân nhiễm HCV. Mồi và probe được thiết kế trong vùng 5’UTR có tính bảo tồn cao của bộ gene HCV và khuếch đại một trình tự có kích thước 244 bp. Kỹ thuật cho phép định lượng HCV-RNA của cả 7 kiểu gen khác nhau của virus HCV.

           Ngoài ra tại Khoa C17 kỹ thuật realtime PCR được ứng dụng để phát hiện các mầm bệnh khác như lao, não mô cầu, HPV, HSV, CMV, EBV…

Liên hệ: Khoa Sinh học Phân tử
Điện thoại:  04. 62784169

Chia sẻ